随着药物靶点复杂性的增加,哺乳动物细胞系统中的基因重组蛋白质生产变得越来越普遍。通过瞬时转染的方式 适当的进行蛋白质的折叠、组装和翻译后修饰对于哺乳动物细胞表达也具有重要的意义 。
源自 CHO 和 HEK 293 细胞的悬浮细胞系通常用于哺乳动物蛋白质生产。这些细胞系具有许多理想的特性,包括高表达水平、可扩展性(密度和体积)等等。
稳定细胞系构建会使用稳定的转染剂,以实现批次间的一致性和大规模的低成本。在过去十年中的细胞转染方面也有着许多进展,瞬时转染方法在改进的细胞系、表达载体、培养基和递送方法、哺乳动物蛋白表达等方面也被广泛使用。
在许多药物发现应用中,使用瞬时转染方法快速筛选蛋白质构建体是有益的,因为它可以同时评估各种靶分子或蛋白质亚型。在多数情况下,瞬时转染是并行进行的,而更多资源密集型的稳定细胞系也正在开发中。
转染技术的使用稳定的转染试剂盒 ,可以提高悬浮 CHO 和 293 衍生细胞中的抗体蛋白滴度。比如:使用 Mirus Bio 的技术,通过添加质粒 DNA、Trans IT-PRO 转染试剂和 PRO Boost 试剂在无血清培养基中制备转染复合物。
将复合物孵育 10-30 分钟后,可以将它们直接添加到正常生长培养基中的细胞中。使用快速转染试剂盒进行转染,无需在转染后更换培养基,适用于瞬时转染和稳定转染。对于分泌型抗体构建体,通常在分批发酵转染后 5-7 天获得Max滴度。
在优化瞬时转染方案期间应当考虑以下几个参数,主要包括:转染时的细胞密度、DNA 浓度、试剂与 DNA 的比率和细胞培养基。